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牧医所首次成功构建猪细小病毒的感染性克隆

时间:2019-04-15 18:46:43来源:内蒙古农业网作者:
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  近日,中国农业科学院北京畜牧兽医研究所宠物疫病防控科技创新团队利用反向遗传技术,在国际上首次成功构建了猫细小病毒和猪细小病毒的感染性克隆,建立了一种快速构建猪细小病毒全长感染性克隆的方法。该研究为今后细小病毒疫苗的研发提供了良好的载体平台,也为其它细小病毒成员全基因组的构建提供了思路,开拓了一条新途径。相关研究成果在线发表在《病毒学文献(Archives of Virology》上。

  近年来,猪细小病毒感染呈扩大上升趋势,给全球养猪业造成了巨大的经济损失。猪细小病毒是引起猪繁殖障碍的主要病原之一,感染的主要对象是孕猪,特别是怀孕前的初产母猪,能够引起怀孕母猪流产、产死胎、胎儿木乃伊化等,而母体通常缺乏临诊症状。

  该团队首先利用人工基因合成的方法将猪细小病毒(BQ分离株)构建到改造后的pBlueScript II SK载体上,再利用PCR扩增猪细小病毒基因组的中间编码区序列,并进行同义突变,形成限制性内切酶切位点,最后通过无缝克隆技术,构建成猪细小病毒质粒,利用特异性引物和限制性内切酶对筛选的克隆质粒进行分析和验证,将验证正确的质粒转染进PK-15细胞中,进行感染性克隆病毒的拯救,最终成功拯救出包含猪细小病毒全基因组(携带遗传标记限制性内切酶)的感染性克隆病毒。

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